MVE液氮罐儲存牛凍精的過程及注意事項

牛的凍精改良技術是目前使用多、有效的一種繁殖技術，凍精的正確保存及使用，是保證牛正常受胎的前提之一，在貯存和使用牛凍精時應注意，下面是利用成都金鳳液氮罐儲存的過程和注意事項

MVE液氮罐儲存牛凍精保存過程：

稀釋后的精液，采用逐漸降溫法。在1—1.5h內，使稀釋精液的溫度降到4—5℃;然后再在同溫的恒溫容器內平衡2—4h。平衡、封裝后的細管精液上架碼放是應注意細管擺放方向，把棉塞封口端靠近操作者，超聲波封口端遠離操作者，入冷凍儀時亦應如此放置。每架上放上根類似于細管的標記物，一頭牛用同一顏色的標記物，便于識別。如同一架上有不同牛的細管精液，要分開碼放，兩頭牛之間要隔開一些距離，以免混淆。

MVE液氮罐儲存牛凍精的過程及注意事項

冷凍儀是全自動冷凍研磨機。冷凍儀與低溫柜應盡量靠近，開啟液氮罐閥門把冷凍儀降溫4℃，關閉風扇電源，待風扇*停止后把已排滿待凍細管的架子迅速放入冷凍儀，蓋嚴蓋子按電腦預先設定好的冷凍曲線程序自動完成冷凍過程。如果凍精細管數量不足時，要填充備用塑料管和細管架以保持冷凍曲線程序自動完成冷凍過程，確保凍精質量。

精液冷凍過程中要求溫度必須直線下降，不得回升。特別是不得進入精子冷凍-15—-50℃的危險溫區，使精細胞內出現冰晶而造成精子死亡。

當細管溫度降至-144℃時，打開冷凍儀蓋子，將凍制好的細管凍精取出快速以25支包裝單位裝入特制的塑料拇指管內，迅速浸入液氮中待檢。

解凍后在37℃環境下前進運動精子占總精子數的百分率為精子活力。牛冷凍精液的前進運動精子數是評價凍精產品質量的一項重要指標之一。該項指標不僅與受胎率有關，而且關系到凍精產量及種公牛遺傳資源的利用率。因此有效精子數要達到國家標準(GB4143-2008)每劑前進運動精子數>1500萬個。

解凍溫度如同精液冷凍一樣，冷凍精液在融解過程中同樣也要順利通過危險區，不會對精子造成冰晶損傷，目前常用解凍溫度為38℃左右，解凍10s即可。用紙將解凍后的精液細管擦干，將精液滴在載玻片上進行鏡檢，經檢查合格的入庫保存，不合格的廢棄。解凍后精液活力應保持在35%以上。

用液氮罐儲存牛凍精的注意事項：

1、牛凍精應貯存于液氮罐的液氮中，設專人保管，每周定時加一次液氮，并經常檢查液氮罐的狀況。

如發現液氮罐外殼結霜，應立即將凍精轉移入其它液氮罐內保存，包裝好的凍精由一個液氮罐轉換到另一個液氮罐時，在液氮罐外停留的時間不得超過3秒，取存凍精后要蓋好液氮罐罐塞，在取放蓋塞時，要垂直輕拿輕放，不得用力過猛，防止液氮罐罐塞折斷或損壞，移動液氮罐時，不得在地上拖行，應提起手柄抬起罐體后再移動。每頭公牛的凍精應單獨貯存,貯存凍精的容器每年至少清洗一次并更換新鮮液氮。

2、使用冷凍精液時，應注意公牛的品種、名號及批號、作好記錄。

MVE液氮罐儲存牛凍精的過程及注意事項

由液氮罐提取精液，精液在液氮罐頸部停留不應超過10秒，儲精瓶停留部位應在距頸管部8cm以下;顆粒精液在2.9%檸檬酸鈉液1～2mL中，水浴加溫在(40±0.2)℃解凍;細管精液直接投放在(40±0.2)℃溫水中解凍;精液鏡檢在38～40℃的溫度下進行，精子活率不應低于30%，每劑量直線運動精子數顆粒精液在1200萬個以上，細管精液在1000萬個以上，符合這些標準的精子才可用于輸精。

3、牛冷凍精液現在多用0.25毫升微型細管包裝。用于人工授精的冷凍精液應來源于系譜齊全、經后裔測定的公牛的精液，而不能因為價廉選用質量差的公牛精液。

冷凍精液解凍后，精子活力不低于0.35，精子復蘇率不低于50%，每一劑量直線前進的精子數不低于1000萬個，精子畸型率不高于20%，精子頂體完整率不低于40%，無病原微生物。購買的冷凍精液要在液氮罐中妥善保存，特別要經常查看液氮面，及時補充液氮。

液氮罐儲存牛凍精的過程及注意事項

液氮罐中轉移冷凍精液注意事項：

從液氮罐中轉移冷凍精液，或者運送冷凍精液時要應小心，減少精液在室溫狀態下的時間，做好不超過幾秒鐘，因此，用于運輸和儲存容器應并排放置，始終保持在液氮罐霜線下面，而定位，識別和抓取吸管時，用一個預冷的止血鉗或鑷子和轉移，將吸管一個接一個地快速送到液氮罐。

小心不要將吸管掉進罐底部，因為它們在這個溫度下非常脆，很容易破裂。降低將吸管慢慢地放入罐中然后再加入罐中，重復這個過程，直到所有的吸管都裝滿了。